色譜分析中的梯度洗脫是一種常用的洗脫方式，它可以改善大分子化合物方法的重現(xiàn)性，并且分離的過程通常比較快，效率高而且簡便。

梯度洗脫主要分為線性梯度、曲線梯度和分段梯度，其中線性和分段梯度應(yīng)用最廣。

以下是使用梯度洗脫的常見原因：

1. 樣品極性范圍較大，具有較寬的K值范圍。這超出了等度洗脫的優(yōu)先目標(biāo)范圍（1≤k≤20），若采用等度洗脫可能會導(dǎo)致樣品運行時間過長，分離度不夠或目標(biāo)化合物殘留未洗脫下來等問題。若采用梯度洗脫，則可以大大縮短方法的運行時間，提高分離效果，避免殘留問題的發(fā)生等。
2. 樣品中含有晚出峰的干擾物，會污染色譜柱或者是在后續(xù)運行中才洗脫出來；此外，樣品中若含有極性大的化合物，在等度洗脫的時候也可能會干擾樣品中前端出峰的目標(biāo)化合物的分離。采用梯度洗脫往往就能夠得到更好的分離，而可以省去樣品處理的過程。

對于一個未知樣品，通常反相色譜條件最初的流動相梯度會參照如下方法進(jìn)行設(shè)置。如果在上述條件下，30分鐘之后還有化合物被洗脫下來，則需要考慮更換保留能力更弱的固定相，或更換洗脫能力更強的有機溶劑，重新進(jìn)行實驗。